实验 食品中苯甲酸(或山梨酸)的高效液相色谱法分析
(1) 实验目的
掌握液相色谱法测定食品中苯甲酸含量的原理、色谱分析的参考条件及各项操作。
(2) 原理
样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH值至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱柱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
(3) 试剂
①优级纯甲醇；稀氨水(1：1)；2 ％碳酸氢钠溶液；0.02 mol／L乙酸铵溶液：称取0.77 g乙酸铵，加水至500 mL，溶解，经滤膜(0．45μm)过滤。
②苯甲酸标准储备溶液准确称取0.1000 g苯甲酸，加2 ％碳酸氢钠溶液5 mL，加热溶解，移人100 mL容量瓶中，加水定容至100 mL，摇匀。此溶液每毫升含苯甲酸l mg。
③山梨酸标准储备溶液准确称取0.1000g山梨酸，加2 ％碳酸氢钠溶液5 mL，加热溶解，移人100 mL容量瓶中，加水定容至100 mL，摇匀。此溶液每毫升含山梨酸为1 mg。
④苯甲酸、山梨酸混合标准溶液吸取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0 mL，置100 mL容量瓶中加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1 mg/mL，经0.45μm滤膜过滤。 ⑤苯甲酸、山梨酸混合标准曲线制作分别吸取苯甲酸、山梨酸标准溶液(含苯甲酸、山梨酸分别为0.1 mg/mL) 2 mL, 4 mL, 6 mL, 8 mL于10 mL容量瓶中,用纯净水定容, 经0.45μm滤膜过滤。
(4) 仪器设备
高效液相色谱仪(带紫外检测器)。
(5) 操作方法
①样品处理
汽水：称取5.00—10.0g样品，置小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1：1)调pH值约7。加水定容至10-2 0mL，经0．45μm滤膜过滤。
果汁类：称取5.00—10.0g样品，用氨水(1 ：1)调pH值约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经0．45μm滤膜过滤。
配制酒类：称取10.0g样品，放人小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1：1)调pH值约7，加水定容至适当体积，经0．45μm滤膜过滤。
②高效液相色谱分析参考条件色谱柱：YWG—C18 4.6mmb×250mm，10μm不锈钢柱；流动相：甲醇—0.02 mol／L乙酸铵溶液(5：95)；流速：1 mL／min；进样量：l0μL；紫外检测器：230 nm；灵敏度：0.2AUFS。
根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
(6) 结果计算
样品中苯甲酸的含量按下式计算：
式中：X——样品中苯甲酸的含量，g/kg；
A——进样体积中苯甲酸的质量，mg；
V2——进样体积，mL；
V1——样品稀释液总体积，mL；
m——样品质量，g。
(7)方法分析及评价
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