动物胃黏膜上皮细胞的培养
实验材料：
1.动物胎体胃黏膜，胃溃疡或胃癌手术切除的正常胃黏膜组织
2.1%Ⅳ胶原蛋白或1%明胶铺培养瓶，4℃冰箱内过夜，使用前在37℃培养箱内放置2h，然后用培养液浸洗1次。
3.不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4
4.250000U/LⅠ型胶原酶或125000U/LⅠ型胶原酶和0.5%透明质酸酶，DMEM配置
5.解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊
6.离心管（15ml、50ml）
实验方法：
1.取妊娠19-21d胚胎大鼠，切开腹壁，取胃底部黏膜组织，放入预冷的PBS中，然后冲洗3次。
2.在解剖显微镜下，用眼科镊仔细剥除黏膜固有层。将黏膜上皮组织剪成1mm 3 左右的小块。
3.将组织块放入消化液中，在37℃条件下消化1-3h。然后，加入含血清培养液，终止消化。
4.用200目不锈钢筛网滤出组织块，收集滤液，离心（1500r/min，5min）。用PBS洗涤2次。
5.离心后，吸去上清液，加入培养液，混悬沉淀细胞。将细胞悬液加入培养皿或培养瓶中，放入37℃，含5%CO2 的孵箱中培养24h。
6.吸去培养液，用PBS浸洗。然后，加入培养液，继续培养。以后每隔2-3d换液1次。
动物肠黏膜上皮细胞的培养
实验材料：
1. 动物胎体小肠黏膜或死亡胎儿的小肠黏膜
2. 1%Ⅳ胶原蛋白铺培养瓶，放超净工作台上干燥
3. 不含Ca2+ 和Mg 2 + 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4
4. 300000U/LⅪ型胶原酶和0.1g/LⅠ型中性蛋白酶混合消化液，DMEM配置
5. 解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊
6. 离心管（15ml、50ml）
实验方法：
1. 取妊娠17-19d胎鼠，放入70%乙醇中消毒1min。经腹正中切口取出小肠，放入预冷的PBS中。
2. 用PBS冲洗后，剪除肠系膜。纵行剪开肠壁，用PBS冲洗3次，洗去粘液。
3. 将肠壁剪成1mm 3 左右的小块的组织块，放入20ml消化液中，37℃水浴中振荡消化30min。
4. 用吸管反复吹打组织块3-5min，然后以1000r/min，离心5min。吸去消化液后，加入PBS，反复吹打，悬浮沉淀的肠绒毛组织。在相差显微镜下观察可见单个黏膜上皮细胞或隐窝细胞团。
5. 将消化下来的细胞或细胞团加入分离管中，再加入分散液，吹打均匀，静置1min。然后，收集含细胞或细胞团的上清液。重复3-4次。
6. 将收集的上清液离心（1500r/min，5min）。用分散液将单个细胞和肠隐窝细胞团混悬，离心（1500r/min，5min），重复3-4次。
7. 用培养液混悬沉淀细胞，将细胞悬液加入培养皿或培养瓶中，放入37℃，含5%CO2 的孵箱中培养。
8. 48h后换培养液，以后每隔2-3d换液1次。
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